PERSIAPAN PEMBUATAN SEDIAAN DARAH TEBAL DAN TIPIS

Diluar perkembangan pesat berbagai te hnik  serologi , diagnosa malaria yang baku terus dilakukan melaui pemeri ksaan sediaan  darah tepi secara mikroskopik. Metode ini merupakan salah satu cara untuk membedakan 4 jenis Plasmodia yang menyebab-kan malaria pada manusia.

Pemeriksaan sediaan  darah tebal merupakan langkah utama karena cara ini mempunyai keuntungan konsentrasi parasit sampai 20 kali  lipat dibandingkan dengan  sediaan  tipis, meskipun penampakan para sit yang berubah da n
memerlukan  pengalaman untuk identifikasi spesies. Jika parasit telah ditemukan maka penetuan jenis parasit dapat dikuatkan dengan pemeriksaan
sediaan  tipis. Idealnya , darah harus  di ambil saat pasien sedang demam. Sangat penting untuk melakukan prosedur  penyiapan sediaan  tebal dan tipis yang akan diwarnai dan di pakai untuk menentukan diagnosa malaria dengan benar.

Sediaan Darah Tebal.  Sediaan darah tebal dibu t  tidak kurang dari 20ul  darah. Sel darah merah terhemolisasi pada sediaan darah tebal ini ;  nukleus leukosit  dan parasat malaria yang ada  merupakan elemen yang dapat  dilihat. Hemolisis dan pengeringa n ya ng lambat yang terjadi pada penyiapan sediaan darah menyebabkan distorsi morfologi Plas modia, mengakibatkan pembedaan spesies memerlukan keahlian dan  peng alaman. Sediaan dara h tebal di pak ai untuk mendeteksi infeksi, dan memperkirakan densitas parasit.  Sediaan darah Tipis.  Sediaan darah ti pis harus difiksasi dengan methanol absolut untuk mencegah terjadinya hemolisis. Sel darah merah akan berbentuk tetap seperti semula, dan setiap Plasmodium  yang ada akan tetap berada dalam erythrocytes. Identifi kasi jenis spesies biasanya dilakukan dengan
mengguna kan sed i aan darah tipis setelah di lakukan deteksi parasit pada
sediaan darah tebal.
       
Jenis Spesimen         :  Darah segar dari ujung jari.
Penyiapan Pasien      : 1 .  Mintaijin pasien untuk membuat sediaan darah
darah.                        2.  Tanyakan pasien jari mana yang  boleh ditusuk.

Pengambilan Darah  :  Bila ada dugaan malaria. Ulangi sediaan  darah darah bila hasilnya negatif.  Frekwensi                                   maksimum satu kali per jamnya.
Pengambilan Darah
    •   Darah segar dapat diambil dari penusukan jari (sekitar 20ul) atau dari phlebotomy vena.
    •   Lakukan pencegahan umum (sarung tangan, cuci tangan, penanganan dan pembuangan benda tajam              dan alat lain yang terkontaminasi darah dengan benar)


Alat dan Bahan

 1.  Kapas alkohol 70%
 2.  Kapas kering / kain kasa 2x2
 3.  Slide  Frosted end (Cara pembersihan slide – lihat dibawah)
 4.  Pensil (untuk memberi label pada slide)
 5.  Lanset steril

Persiapan :

       Membersihkan slide:

1.  Buka paket slide baru.
2.  Masukkan slide ke dalam bak berisi air sabun (gunakan sabun cair
     standar)  dan rendam selama 6 jam.
3.  Bilas slide de ngan air mengalir.
4.  Keringkan setiap slide dengan kassa atau handuk lembut.
     Simpan dalam kotak slide plastik tertutup.
           
Langkah-langkah Prosedur:

1. Tulis nama, tanggal, jam (penusukan jari atau pengambilan darah melalui
    vena) dan nomer pasien pada slide.
2. Bersihkan jari pasien dengan kapas alkohol.
3. Diamkan paling tidak 10 detik sehi ngga alkohol kering. Pegangi terus
    tangan pasien selama proses ini.
4. Dengan menggunakan lanset, tusuk  bagian ujung jari yang telah
    dibersihkan tersebut.
5. Bersihkan tetes da rah pertama dengan kapas kering.
6. Bekerja dengan cepat, siapkan 3 slide sesuai prosedur berikut:
    a)   Pegang bagian jari yang ditusuk  menghadap ke bawah, ambil slide yang sudah ditulisi dan teteskan               darah sebanyak 3 tetes untuk sediaan darah tebal (kira-kira 20  μl) dan satu tetes kecil untuk sediaan           darah tipis (kira-kira 2  μl).  
    b)   Pegang slide menghadap ke atas dan letakan pada permukaan yang rata. Setelah darah diambil untuk           ketiga slide, tekan daerah tusukan dengan kapas kering dan minta pasien untuk memegang dan                     menekannya selama kurang lebih 1 menit.
    c)   Gunakan slide bersih sebagai “pendorong:” Letakan uj ung slide bersih dengan posisi membentuk                   sudut 45  derajat dengan slide yang ada darahnya di depan satu tetes darah untuk sediaan darah tipis.           Perlahan mundurkan slide bersih  sambil memegang slide sampel dengan tangan yang satu lagi. Sentuh           tetesan darah dan saat darah menyebar secara lateral di sepanjang ujung slide bersih, segera dorong             slide bersih ke depan dengan cepat dan mantap, pastikan untuk mempertahankan kontak se cara terus           menerus antara  pendorong dan permukaan slide dan jangan berhenti sampai slide bersih pendorong             berakhir di  ujung slide sample darah.
    d)    Catatan:  Gunakan slide pend orong bersih lainnya untuk setiap sediaan darah darah yang disiapkan.
    e)   Gunakan sudut slide bersih yang sama untuk membuat sediaan darah tebal dengan mengaduk 3 tetes             darah dengan gerakan memutar untuk membentuk sediaan darah  darah dengan ketebalan yang                     merata.
     f)   Letakan slide di atas  permukaan yang rata dan kering sampai slide benar-benar kering sebelum                   melakukan pewarnaan atau menyimpannya dalam kotak slide. Jangan dipanaskan supaya kering lebih           cepatkecuali ada ijin dari su pervisor klinik. Memanaskan slide tidak boleh terlalu panas sehingga                   tidak dapat disentuh. Lindungi slide yang sudah kering dari lalat dan debu.